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色谱柱固定相填充方法与技巧

点击次数:1512 发布时间:2018-04-25
  色谱柱固定相填充方法与技巧
  色谱柱在色谱仪分析检测过程中起着分离样品组分的作用,其分离度直接影响色谱仪检测的灵敏度和速率。影响色谱柱分离度的因素包括固定相和流动相的选择、流速和温度的控制、理论塔板度和塔板数、对称因子、容量因子和选择性因子的重复性。
  其中,组分在色谱柱上的分离效果,主要取决于用在填充色谱柱的固定相。 固定相填充质量的好坏直接影响填充柱的柱效,因此,色谱柱固定相的填充方法也是重要的。一根填充质量较的色谱柱,通常其理论塔板数应该达到2000-3000/m,根据填充物粒度的大小,可分为湿法装柱和干法装柱。
  湿法装柱是把硅胶用适当的溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压用淋洗剂"走柱子",本法zui大的点是一般柱子装的比较结实,没有气泡。
  干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧,至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适度,zui后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的结实。接着是用淋洗剂"走柱子",一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
  湿法装柱和干法装柱这二者各有劣,不论干法还是湿法,硅胶(固定相)的上表面一定要平整,并且硅胶(固定相)的度一般为15cm左右,太短了可能分离效果不好,太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。为了获得*的填充密度,可选择适当的加压、减压或是手工填充的方法进行填充色谱柱。
  (1)加压法 加压法是将填充柱的一端塞好硅烷化的玻璃棉,另一端与填料池连接。将固定相倒入填料池,填料池的另一端出口与氮气或空气钢瓶的减压阀连结。对于常见内径为4.5mm的填充柱,可调节气流为30ml/min(气流应随内径大小作相应调整),将填充池内的固定相压入填充柱中,同时用木棒轻敲填充柱体使固定相填充均匀。装柱要求要填充得均匀,紧密,切忌有空隙。固定相填充完毕后,在原来连接填充池的一端塞上硅烷化的玻璃棉,注意这一端应该与色谱仪的进样室相连接,另一端作为出口端与检测器相连接,不能接反。 加压柱是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行)。是在容易分解的样品的分离中适用。压力不可过大,不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
  (2)减压法 减压法一般用于填充长柱子。这个方法采用真空泵抽气,将填充柱的一端塞好硅烷化的玻璃棉后与真空泵的缓冲安瓶相连接。为了防止抽气时潮湿空气进入而使固定相性能受影响,可以在填料池加入固定相后,在入气口接氯化钙和硅胶干燥塔,其他操作过程与加压填充法相同。 减压柱能够减少硅胶的使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝结),以及有些比较易分解的东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气(的噪音,而且时间长)。
  (3)手工填充法 手工填充法一般只用于某些涂有沸点较低固定液的固定相的填充。通常采用边装边敲打的办法。每次加进柱内的填料约5cm。填充时应注意两点:
  一是固定相要填充均匀和紧密适度,柱内不留有死空间或者间隙;
  二是要避免填充过程中敲打振动过猛,造成固定相机械粉碎。
  压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候,常压柱是效率zui的,但是时间也zui长。

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