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HPLC柱前衍生和柱后衍生的相关问题

点击次数:1115 发布时间:2019-06-21
     HPLC柱前衍生和柱后衍生的相关问题
    柱前衍生被测组分先通过衍生化反应,转化为衍生化产物,然后再经过色谱柱进行分离。液相色谱法中柱前衍生的目的是:通过衍生化反应,使原来不能直接被检测的组分转化为能被所用检测器检测的物质;使被测组分与衍生化试剂有选择地参加反应,而与样品中的其他组分分离;改变被测组分在色谱柱的出峰次序,使之更有利于分离。柱前衍生的优点是可以不必严格限制衍生化反应条件,可以允许较长的反应时间及使用各种形式的反应器。其缺点是当一个复杂组分样品经过衍生化反应后,有可能产生多种衍生化产物,给色谱分离带来困难。
    柱后衍生利用衍生反应使被测物与相应的试剂反应,以改变其物理或化学性质,使其被检测到。例如将发色基团或荧光基团键合到样品中去,多极放大检测灵敏度,柱后衍生系统开创了柱后衍生系统性能、价格及外形的新标准。
    HPLC柱前衍生和柱后衍生的相关问题?1)为什么要衍生?2)衍生化的分类?3)进行衍生,适用的化合物有哪些?4)进行衍生化的要求有哪些?5)柱前衍生和柱后衍生的优缺点?
    答:色谱技术中的化学衍生法系指在色谱过程中用特殊的化学试剂(一般称为衍生化试剂或标记试剂)使样品成分转变相应的衍生物之后进行分离检测或进行检测的方法。目的为:
    1.将紫外—可见强吸收功能基团引入被检测对象或将其转变为荧光衍生物,以提高检测灵敏度;
    2.提高对分析样品的分离和选择性。
    从是否与HPLC系统联机的角度,化学衍生法分为在线(on line)与离线(Off line)两种。从发生衍生化的场合,分为柱前衍生法(pre-columnderivatization)与柱后衍生法(post-columnderivatization)两种。
    目前,在HPLC中,以离线的柱前衍生法(简称柱前衍生法)与在线的柱后衍生法(简称柱后衍生法)使用居多。

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