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液相色谱柱清洗、活化方法概述

点击次数:780 发布时间:2019-09-25
     液相色谱柱清洗、活化方法概述
    当色谱柱使用较长时间之后,就可能发生柱压升高、分离度不好、柱效降低、峰形不好等情况,这时就需要根据故障原因对色谱柱进行清堵与再生,以延长色谱柱的使用寿命。具体原因及处理方法如下:
    (1)筛板堵塞与柱头塌陷:主要现象有柱压严重升高或不稳定、色谱峰拖尾、色谱峰变宽、色谱峰分叉、秃峰等,需要进行清堵与弹性复原处理。(此方法适合于任何类型有相同故障的色谱柱的处理,不同的是溶剂要与相应类型色谱柱匹配。)
    主要处理方法如下:
    ①一般情况下,将色谱柱反接,不接检测器,用纯水或水-有机相(多用甲醇、乙腈)(95:5)以0.6ml/min流速冲洗约4h→再正向连接,接或不接检测器,用纯水或水-有机相(多用甲醇、乙腈)(95:5)以0.6ml/min流速冲洗约1h→再提高流速至1.0ml/min冲洗1h,观察柱压变化。若不凑效,则拧开柱头螺母(色谱柱进口),小心取下筛板,用5%左右的硝酸溶液超声处理20min左右,再用纯水超声20min左右。用小勺清理掉柱进口污染的部分填料,再将用乙醇调和后的相应的硅胶装入柱入口(也可用已经报废的同类柱中的填料替代),用平面不锈钢小铲压紧填平至略高出柱管口,但量不宜太多,否则,压得太紧柱压会升高,然后装上清洗过的筛板,注意筛板安装方向必需与原装相同,后紧固。
    ②冲洗与饱和:清堵紧固后,先反向连接色谱柱,不接检测器,用纯水或水-有机相(多用甲醇、乙腈)(95:5)以0.3ml/min流速冲洗约4h→再换成甲醇以0.5ml/min流速冲洗约2h →再正向连接色谱柱,接或不接检测器,用纯水或水-有机相(多用甲醇、乙腈)(95:5)以0.3ml/min流速冲洗约2h→再换成甲醇以0.5ml/min流速冲洗约1h→然后用甲醇或乙腈以1ml/min流速冲洗约1h以上,再根据测试用流动相比例调整水-甲醇(或乙腈)比例,以1ml/min流速冲洗约1h,后用测试用流动相平衡2h,进样测试即可。
    ③特别说明:如不是特殊情况,按其他办法可行,则好不要反冲色谱柱和拆卸筛板。(2)柱效降低:主要特征性现象有柱压基本正常,但出现拖尾峰、秃峰、分叉峰、前延峰、峰变宽、基线漂移、理论板数降低、分离度降低等。需要进行再生处理,
    具体方法如下:
    ①一般情况下,顺接色谱柱,按如下溶剂顺序及条件冲洗:95%水-5%甲醇(或乙腈)(1.0ml/min,1h以上)→100%甲醇(1.0ml/min,1h以上)→100%乙晴(1.0ml/min,1h 以上)→75%乙晴-25%异丙醇(0.5ml/min,10倍柱体积以上)→100%异丙醇(0.5ml/min,10倍柱体积以上)→100%二氯甲烷(0.5ml/min,10倍柱体积以上)→100%正己烷(0.5ml/min,10倍柱体积以上,根据实际情况可忽略)→100%异丙醇(0.5ml/min,20倍柱体积以上)→95%水-5%甲醇(或乙腈)(0.5ml/min,30min;再升至1.0ml/min,10倍柱体积以上)→检测用流动相平衡2h或至基线平稳,进样测试。在冲洗过程中,随时关注柱压变化,确保不超过4000psi;若超出,可通过降低流速,升高柱温来调整,具体操作可咨询具备相关专业知识背景和实践经验的人士。
    ②若上述方法效果不理想,可按如上溶剂顺序和条件,先反接色谱柱冲洗→再顺接色谱柱,用100%乙腈以1ml/min流速冲洗约2h→再用与流动相同比例的水-有机相以1ml/min流速冲洗约30min→后用流动相平衡2h或至基线平稳,进样测试即可。
    ③特别说明:再生过程必须随时关注柱压变化,柱压过高易导致硅胶变形与开裂及键合相极性端连接顺序紊乱,同时要保证再生时间足够。

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