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使用液相色谱柱时应当注意哪些事项

点击次数:661 发布时间:2020-08-21
  使用液相色谱柱时应当注意哪些事项
  液相色谱柱的技术主要包括填料技术和装柱技术,填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术没有想象中那么简单,不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度,装柱工艺都有所不同,要装出紧密、稳定、均一的柱床,需要经验积累。
  一般情况下,正相反相柱应该都能反冲,只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲,不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉,反冲后还是正着用比较好,以免柱子的两头都被污染。建议正向使用,反向冲洗。
  使用该色谱柱时应当注意以下事项:
  避免过高柱压:虽然液相色谱柱能耐受的压力可达6000psi,但过高及过大的压力变化均会缩短色谱柱的寿命,避免的方法是:柱压过高时,尽可能采用较小的流速,以不超过柱允许压力的一半为宜。当流速较大时,应采取流速梯度的办法使流速分步到位。使用手动进样阀时,进样阀的切换要尽可能的快。否则超过20%的压力冲击会很快使柱报废。当使用多柱联用时,柱切换要避免在高压下进行。
  当流动相中含有缓冲盐时,则过滤是必要的,当缓冲溶液放置一段时间(视环境温度不同而异,夏季一般不超过48h,冬季一般不超过一周)后,在使用前还应重新过滤。
  过滤流动相和样品:流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成,所有经过色谱柱的流动相均应过滤,但在实际操作上应视具体情况而有所区别:当有机溶剂用色谱纯级,水用石英亚沸水或其它超纯水时,在能确保水和有机溶剂的质量且没有受到污染时,过滤并无更多实际意义。
  需要加装保护柱:保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学杂质的同时,也可以有效除去流动相和样品中的不溶物。尽管现在的色谱仪在流动相吸入口、进样阀后部以及在色谱柱的两端都装有1、2μm等不同孔径的滤器,但滤器只能除去不溶性颗粒而不能除去化学污染,因此加装保护柱是必要的,特别是在分析中药、中成药等复杂混合物和生物样品时更是保护分析柱*的措施。

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