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反相色谱柱怎么使用和维护?

点击次数:625 发布时间:2021-11-30
  反相色谱柱是迄今在高效液相色谱中应用广泛的技术,主要是因为它适用于分析绝大多数的非极性物质和很多的可离子化的及离子化合物。做好反相色谱柱使用及维护工作,可可以有效延长色谱柱使用寿命。
  1、在条件允许情况下,在使用前尽量对新色谱柱按照说明书方法进行柱效测试。以确保色谱柱的正常。
  2、所有硅胶基质色谱柱使用温度应低于60℃。
  3、样品:尽量将样品溶解在流动相或极性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱,则需要将样品溶解在初始流动相或极性相近的溶剂中。样品溶液不应含有任何颗粒物,尽量使用0.5μm或更小粒径的滤膜过滤。样品溶液如果使用强溶剂(例如,流动相为水,样品溶剂为甲醇),为达到较好峰形,需要降低进样量
  4、流动相:所有流动相,特别是含有缓冲盐的流动相,尽量当日实验当日配制;如果使用了前日配制的流动相,请确保流动相pH值没有变化,并确保流动相没有长菌。 流动相的pH值取决于您的应用和色谱柱填料类型。我们建议在所有的色谱柱尽量在pH2~8范围内使用。请尽量避免在常规流动相中使用很高比例的水(>95%)作为流动相,可能会造成保留时间的不稳定或者色谱柱键合相的损害。
  5、色谱柱平衡:在进行分析之前,请使用至少20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱,以使色谱柱达到平衡。
  6、色谱柱保护:对于“脏”的样品以及组分未知的样品,请尽量使用在线滤器或保护柱,如果可能,使用SPE小柱对样品进行前处理是更好的选择。

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