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色谱柱的物理性质、化学性质介绍
点击次数:2277 发布时间:2022-05-17
色谱柱的物理性质、化学性质介绍
色谱柱的选择直接影响了液相色谱分析中分离效果的好坏,选择合适的色谱柱可以缩短方法开发所需的时间,并且使方法更具稳定性。
根据色谱柱的参数可以给我们提供一个初步的选择,但由于各个仪器厂商的填料技术和键合技术都有差异。即使都是C18柱,不同品牌、同一品牌不同系列都有不同的功能,有能耐受低pH值的、有耐温的、有适合碱性样品的等等。
一、物理性质:
1、柱长,内径,如250*4.6mm。一般柱长在2—250mm,柱越长,分离度越,但柱压更,分离所需时间更长;但分离度与理论塔板数的平方根成正比,所以一昧增加柱长并不是*的分离手段,一般情况下,150mm、5um的填料可以提供足够的塔板数。
2、粒径,影响色谱分离度。粒径越小,分离越快,柱效越,但柱压力越,柱容易被污染,导致柱寿命降低。常见分析柱通常使用5um填料,复杂的多组分样品分离一般使用3.5um粒径,更大内径的制备色谱柱通常使用更大的粒径。
3、孔径,60A,100A,120A,300A等。孔径小,则含孔率,比表面积大,载碳量;色谱柱填料孔径大小需和分子大小相匹配,分子自由进出填料孔并与孔内表面的键合相进行分离分配,通常要求孔径直径是分子直径的3倍以上,一般小分子使用80—120A,大分子使用300A。
4、颗粒形状,一般有球形和不规则形,当使用黏度较大的流动相时,球形颗粒可以降低柱压,延长色谱柱寿命。
二、化学性质:
1、硅胶基质:通用的基质,度大,化学修饰容易,但使用的pH值范围有限(一般为2—8,修饰的可以达到1—12)。
2、聚合物基质:多为聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂,化学稳定,应用pH范围宽,具有更的疏水性,对蛋白质等样品分离效果较好;但度较小,有机溶剂可能导致聚合物溶胀而受损,批次重复性较差,商品化色谱柱不多,一般价格较贵。
3、载碳量:基质表面键合相的比例,载碳量,则保留增加,适合分析非性化合物。
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