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1     压液相色谱法

1.1   范围

    本标准规定了用压液相色谱法测定饮用水及其水源水中草甘膦和氨甲基膦酸。

本法适用于生活饮用水及其水源水中草甘膦和氨甲基膦酸的测定。

本法草甘膦和氨甲基膦酸的zui低检测质量均为5.0ng。若取200uL直接进样则zui低检测质量浓度均为25μg/L。

目前未见有基质干扰的报道。草甘膦可在氯消毒过的水中降解。草甘膦在矿物和玻璃表面有吸附作用。

1.2    原理

采用阴离子或阳离子交换色谱法分离草甘膦和氨甲基膦酸，经过柱后衍生，用荧光检测器检测。柱后衍生反应为用此氯酸盐溶液将草甘膦氧化成氨基乙酸；然后氨基乙酸与邻苯二醛（OPA）和2-巯基乙醇（MERC）的混合液反应，形成一种光的异吲哚产物。氨甲基膦酸可直接与OPA/MERC混合液反应，在次氯酸盐存在下，检测灵敏度会下降。

1.3    材料与试剂

1.3.1  水：用纯水系统生产的水或HPLC水。

1.3.2  磷酸（ρ20 =1.69g/mL）：R304

1.3.6  磷酸二氢钾：R311

1.3.7  乙二胺四乙酸二钠溶液：将0.37g的乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA• 2H2O）加入1L纯水中配置溶度为0.001mol/L的溶液，并经0.22μm或0.45μm的滤膜过滤。

1.3.8  氯化钠：R313

1.3.10  次氯酸钙：R303

1.3.11  氧化试剂：见试剂盒（P/N：R300-01）操作手册

1.3.12  邻苯二醛（OPA）：R301

1.3.13  2-巯基乙醇（MERC）：R302

1.3.14  硼砂：R312

1.3.16  荧光标记溶液：见试剂盒（P/N：R300-01）操作手册

1.3.17  草甘膦：纯度≥99%。

1.3.18  甲基膦酸：纯度≥99%。

1.4    仪器设备

1.4.1  压液相色谱仪：附荧光检测器。

1.4.2  色谱柱：A72545， Comatex SAX， 250X4.6mm,5um

1.4.3  柱后反应器：CoM6000PCR双衍生系统

1.5    样品

1.5.1  样品的性质

1.5.1.1  样品的名称：水样。

1.5.1.2  样品采集后应用聚丙烯容器储存，加入100mg/L的硫代硫酸钠可消除氯带来的影响。样品应储存在4℃、避光的环境中，并在2周内测定。

1.5.2  样品预处理

1.5.2.1样品浓度≥25μg/L时，不需浓缩，取9.9mL的样品和0.1mL 0.1mol/L的EDTA，经0.22μm或0.45μm的滤膜过滤，进样200μL。

1.5.2.2  样品浓度低于检出*需要对样品进行浓缩，取500mL水样，若为悬浮液，将样品通过粗滤膜过滤，取250mL移至500mL圆底瓶中，加5mL盐酸（18.1.3.4）于烧瓶中，5mL盐酸（18.1.3.4）于剩余样品中。在旋转蒸发器中浓缩，缓慢升温从20℃到60℃。在*部分*蒸发前，加入剩余样品和2次5mL清洗液，蒸干，若必要，用干氮去除zui后的痕量水。取2.9mL流动相（若必要调节PH=2）和0.1mL0.03mol/L的EDTA溶解残留。过0.45μm滤膜，进样。

1.6    分析步骤

1.6.1  仪器的调整

1.6.1.1  流动相: 见试剂盒（P/N：R300-01）操作手册

1.6.1.2  柱温：50℃。

1.6.1.3  流速：1.0mL/min。

1.6.1.4  荧光检测器：激光波长Ex=230nm（氘）、340nm（石英卤素或氙），发射波长Em=420nm~455nm。

1.6.1.5  柱后反应条件

1.6.1.5.1  氧化剂流速：0.5mL/min。

1.6.1.5.2  OPA-MERC溶液：流速0.5mL/min。

1.6.2  校准

1.6.2.1  定量分析中的标准方法：外标法。

1.6.2.2  标准样品

1.6.2.2.1  草甘膦和氨甲基磷酸标准溶液：用水配置草甘膦、氨甲基膦酸均为0.1mg/mL储备溶液。稀释储备液配置溶度为10μg/mL、1.0μg/mL系列工作液。储存于聚丙烯瓶中，冰箱保存。每月重配置。

1.6.2.2.2  草甘膦和氨甲基磷酸HPLC校准溶液：用0.001mol/L EDTA二钠溶液配置草甘膦、氨甲基磷酸溶度为0.11mg/mL 储备液。稀释储备液配置0、0.025、0.05、0.10、0.50、1.00μg/mL标准系列工作液。储存于聚丙烯瓶中，冰箱保存。每月重配置。

1.6.2.2.3  标准数据的表示：用标准曲线计算测定结果。

1.7  定量分析 

取200μL水样注入色谱仪，测量峰或峰面积。通过标准曲线的回归分析计算草甘膦和氨甲基磷酸的浓度。浓缩样品可通过浓缩因子（500mL原始样品/3mL），确定原始水样浓度。

1.8  度和度

对样品（加标浓度0.5μg/L~5000μg/L）重复测定六次，草甘膦的相对标准偏差为12%~20%，平均标准偏差为15%。氨甲基膦酸的相对标准偏差为6.6%~29%，平均标准偏差为14.5%.草甘膦的加标回收率为94.6%~120%，平均回收率104%。氨甲基膦酸的回收率为86.0%~100%，平均回收率为93.1%。